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高效液相色谱的须知问题

发布时间:2024-03-21       点击次数:807

液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因?

1、筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子。

3、可能柱超载,减少进样量。

HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法是什么?

1样品量不足,解决办法为增加样品量

2样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

3样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

4检测器衰减太多。调整衰减即可。

5检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数

6检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

7检测池中有气泡。解决办法为排气。

8记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。

9流动相流量不合适。调整流速即可。

10检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。

怎样解决HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?

1泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;

2比例阀失效,更换比例阀即可;

3泵密封垫损坏,更换密封垫即可;

4溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;

5系统检漏,找出漏点,密封即可;

6梯度洗脱,这时压力波动是正常的。

出现峰展宽的原因

1样品体积过大——用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%

2在进样阀中造成峰扩展——进样前后排出气泡以降低扩散。

3数据系统采样速率太慢——设定速率应是每峰大于10点。

4检测器时间常数过大——设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%

5流动相粘度过高——增加柱温,采用低粘度流动相。

6检测池体积过大——用小体积池,卸下热交换器。

7保留时间过长——等度洗脱时增加强溶剂含量,也可用梯度洗脱。

8柱外体积过大——将连接管径和连接管长度降至最小。

9样品过载——进小浓度小体积样品。

简单判断比例阀是否内漏?

设定泵使用一个单独通路(A),打开Purge阀,流速5mL/min,提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面,观察这些通路(BCD)内的溶剂是否随着流动,正常时均不应流动。

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