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Agilent安捷伦液相色谱使用问题与解决方法

1 、如何成为真正的液相高手
（1）、一定要珍惜仪器厂商提供的各种培训，因为他们的培训很有针对性，而且很专业。
（2）、要多做，液相是一个比较复杂的系统，在做样的过程中，总会遇到各种问题，通过自己的大脑解决问题，慢慢积累就会穴道很多东西。其次要敢于动手，不要总担心会把仪器弄坏，拆仪器的时候细心一点就好了，记着各个部件的顺序，连接方式。动手次数多了，成功的机会就多了，也就更有信心了。
（3）、要看一些相关理论的书籍，要了解一些对于液相的分离原理，如何优化色谱系统和峰形，能够自己解决一些分离的问题。这样才是一个液相高手。
如果只是会很熟练的使用工作站和维修仪器，排除故障，我觉得这只是一个操作高手，而不是一个真正的液相高手。

2、新装82341 GPIB 板，如何与ChemStation 通讯?
在 LC ChemStation CD-ROM 中有安装说明，还包括驱动程序安装信息。请在 Windows® Explorer 中查看子目录： \Manuals\Installation\LC Systems。您在此处可找到《安装手册》，其中包含有关如何安装 GPIB 板以及如何调用驱动程序的逐步操作说明。

3、为什么进样后在工作站在线图谱上看不到红色开始线？
ChemStation 软件有一个“在线图谱”窗口，在此窗口中可显示从所连接的检测器接收到的所有信号。当进样样品时，会在“在线图谱”窗口中显示一条竖直的红色“开始线”。这条红色线标志着启动该软件进行原始数据的收集。如果不显示这条红色线，则不会收集数据。 如果不显示“开始线”，请检查检测器上的遥控电缆（如果是 1050 或 1090 系列液相色谱仪的话）。如果缺少遥控电缆，则需要进行安装。如果安装了模-数转换箱或板 (35900 ADC)，则需要从模-数转换设备到液相色谱仪拉一根遥控电缆。检查所有的 CAN 电缆，确保它们都连接到 1100 系列液相色谱仪上

4、完美的波长如何选择
做一个新的方法，关键是选择好的仪器条件，更关键的是波长正确。但是怎样的波长才算是完美的那，比如说我已经作了全扫描，那么怎么去选择波长哪？？？一般选择最大吸收波长为检测波长,当然也要结合自己的实际情况来中和一下如果要达到最大检测灵敏度，最大吸收波长是首位选择。如果你使用的是DAD，那么建议你将Sample WL设定为最大吸收波长，Bandwidth不能低于你设定的slit的值。默认推荐的Bandwidth为半峰宽。如果你在一次分析中有最大吸收波长不同的物质需要同时检测，可以使用检测器的Timetable进行波长的切换避免选用低波长，波长越长越容易做

5、柔性不锈钢毛细管线外面的彩色标记是什么意思？
安捷伦柔性不锈钢管线外部的彩色标记表示管的内径 (ID)： 红色 表示内径为 0.12mm 或 0.005 英寸。 绿色 表示内径为 0.17mm 或 0.007 英寸。 蓝色 表示内径为 0.25mm 或 0.010 英寸。 橙色 表示内径为 0.50mm 或 0.020 英寸。

6、更换活塞密封圈后，建议采用什么磨合程序？
注意这个程序适合于反相密封圈，但不适合于正相密封圈。还会损坏正相密封圈。 安装新的密封圈后，进行最初的“磨合”期。在至少 350bar 的反压下泵入异丙醇 15-30 分钟。这要通过使用原来的色谱柱或阴尼管线来产成压力.。 有关 1100 系列 LC 泵的密封圈磨合程序，请参见此附件。

7、1050和1100 系列 LC 泵的活塞密封圈和活塞的部件号是什么？
旧部件号 新部件号 活塞密封圈 5062-8516 5063-6589 (2pk) 活塞 5062-2441 5063-6586 注意：同时使用新的活塞和密封圈时，不再需要固定器 (01018-22706)。

8、为什么灯不亮？
很可能是灯老化或灯坏了。请按照下列诊断方法对检测器进行测试。如果需要，则请更换灯。 如果问题依然存在，则请致电安捷伦科技公司。

9、什么原因导致液相色谱仪压力过高？
可能的原因：
1. 排气阀里面的 PTFE 滤蕊堵塞。
2. 压力上限设置太低。
3. 压力传感器堵塞。
建议的措施：
1. 打开排气阀。如果压力依然很高，则更换排气阀内的 PTFE 滤芯。
2. 查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。
3. 检查系统内的堵塞部位。（如下所述） 要检查是否堵塞，请采用隔离系统的方法来排除故障： 将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。
①. 如果压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装 ZDV 接头。 A 如果压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。请进行更换。 B 如果压力仍然很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路）。
②. 如果取出色谱柱后压力依然很高，则检查从排气阀到自动进样器的管路。如果压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到旁路状态。 A 如果压力正常，则说明自动进样器堵塞。请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。 B 如果压力依然很高，则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管线.。

10、用不同批号的色谱柱后如何对分析方法进行测试并确认可用此柱？
首先，在色谱柱包装盒的外面找到它的批号。批号的字体比较小，通常在条形码的下面。批号通常以字母“B”开头，后面是 5 位阿拉伯数字。例如，下面示例中的色谱柱批号为 B99091。 如果找不到包装盒，则查看色谱柱标签上的序列号。要从序列号来确定批号，请拨打安捷伦科技公司 HPLC 色谱柱技术支持的电话。他们会请公司生产部门来查询批号，同时确定其它哪些批号的色谱柱可用。 获得所需的批号或知道您的批号后，可使用以下步骤进行订购： 从安捷伦科技公司。使用特殊的部件号 899999-888, 该号码表示此订单是专用色谱柱。 说明要订购的色谱柱的类型、尺寸和填料粒度大小，包括通用部件号。指出您希望色谱柱是哪个批号，或者哪个批号的色谱柱不能用。示例说明: 部件号 899999-888 Eclipse XDB-C18 分析色谱柱，4.6mm x 250mm，(963967-902) 除了批号为 B99091 和 B99079 的专用色谱柱 用于方法确认目的的色谱柱

11、如何避免峰拖尾和峰分叉？
与色谱柱相关的原因及处理方法
1 色谱柱污染; 处理方法:清洗或更换色谱柱
2 色谱柱填料有问题;处理方法:反冲色谱柱或更换柱头过滤片
3 色谱柱中间出现间断;处理方法:更换色谱柱或填充空隙
4 保护柱失效;处理方法:更换保护柱
5 样品分布差;处理方法:改进色谱柱进口的设计
6 与色谱柱无关的原因：柱外体积大、样品过量、流动相组分（添加剂、pH值、缓冲液浓度）改变。

12、什么原因导致液相色谱出现神秘峰&谤诲辩耻辞;？
与色谱柱相关的原因：
1 色谱柱污染; 处理方法:清洗或更换色谱柱
2 保护柱失效; 处理方法:更换保护柱
3 与色谱柱无关的原因：流动相溶不纯、样品里有其他成分、系统里有气泡、电路问题。

13、什么原因导致柱效（理论塔板数）下降？
与色谱柱相关的原因：
1 色谱柱中间出现间断;处理方法:使用类似的填料填充空隙或更换色谱柱
2 保护柱无法再用;处理方法:更换保护柱
3 其他可能的原因：柱外体积大、进样的样品量大、样品溶剂强度比流动相大、流动相的改变。

14、改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响？
填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔板数最多。对于内径为 4.6mm 的色谱柱，10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为 1.5ml/min 时，塔板数最多。

15、改变色谱柱直径对液相色谱分析有什么影响？
如果色谱柱直径减半，则灵敏性增加四到五倍（假设进样量不变）。例如，等量的样品进样到内径为 2.1mm 的色谱柱比进样到内径为 4.6mm 的色谱柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要线性流动保持不变，则柱效率、理论塔板数、反压和分析时间等参数均与色谱柱内径的减小无关。

16、改变填料颗粒大小和色谱柱的长度对液相色谱分离有什么影响？
如果填料颗粒大小减半，则理论塔板数加倍（假设柱长不变）。如果填料颗粒大小减半，则柱压增加为原来的四倍。 如果柱长加倍，则理论塔板数加倍。如果柱长加倍，则分析时间加倍。随着柱长增加，柱压也线性地增加。 以下是一个根据上述信息选择色谱柱的示例： 一个装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱可生成 6000 块理论塔板，这是在很多情况下能提供比较适当的分离的色谱柱效率。将颗粒大小由 10um 减小到 5um，柱长仍为 200mm，则可生成 12000 块理论塔板。然而，这个色谱柱可生成相当于原来四倍的柱压。通常情况下不需要生成 12000 块塔板，因此柱长可减半至 100mm，结果生成 6000 块塔板，同时分析时间也缩短一半；柱压仅比最初装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱高两倍。

17、能否提供一种与我使用的LC 色谱柱相同的色谱柱？
即使用同一种固定相，不同厂商的液相色谱柱也可能具有不同的保留时间。 虽然这里提供了一些不同厂商的色谱柱的参考数据，但这些数据在不同的色谱条件下会有所不同。我们通常根据您的应用情况，向您推荐一种其它的色谱柱。在此之前，我们需要您提供以下信息： 样品的详细信息（样品的成分和要分析的成分）； 是否可以接受液相色谱条件的改变； 能否对您的方法进行一些调整。 如果您不能接受分析条件和/或保留时间的改变，则应该继续使用目前的色谱柱。

18、如何选择液相色谱保护柱？
保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞,及在色谱柱上强吸附组分在色谱柱上吸附。为防止样品的杂质不进入色谱分析柱,不出现不必要的峰展宽，保护柱与分析柱的体积比应在 1:15 至 1:25 之间。 在理想的情况下，保护柱的填料应与分析柱相同，以确保得到分析柱较好的色谱图。尽量使保护柱与分析柱近似。在我们的目录里，将分析柱和与其配套的保护柱列在一起。

19、色谱图上出现鬼峰。如何消除？
可能的原因有：
1. 上次进样遗留组分产生
2. 有污染
3. 有气泡
4. 色谱柱问题
5. 保护柱失效
建议用户:
1. 做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱,。有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱。
2. 洗脱原色谱柱中的原有污染。
3. 为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂。
4. 更换色谱柱。
5. 更换保护柱。
6. 检查流动相纯度。
7. 检查样品中的其他成分.

 
20、我的色谱图上的峰有拖尾现象。如何改善峰形？
可能的原因：
1. 系统内的死体积大
2. 样品在色谱柱上有吸附
3. 色谱柱使用时间很长
建议用户：
1. 尽量减少流动相管线的死体积，确保管线接头的连接合适减小死体积，由于不同生产厂家的管线的接头和密封垫圈有可能不一样，尽量使用安捷伦公司的管线接头和密封垫圈。
2. 使用洗脱更强的流动相
3. 更换新色谱柱

21、什么原因导致基线波动？
基线波动有可能与实验室的温度及湿度变化有关系。需确保室温及湿度稳定，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管进行隔热保温。

22、什么原因导致基线毛刺？
这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认,如果毛剌消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如果毛剌仍然存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。如果需要更多帮助，则请致电安捷伦科技公司。在中国，请拨打800 820 3278。

23、如何减少基线噪音？
无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的前处理以避免污染，并使用 HPLC 级别的溶剂。 连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。如果此时基线平稳，则噪音可能与泵有关系。使用 ChemStation 在线诊断或 LC 手持控制器检查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测器有关。首先，请尝试更换灯。如果问题依然存在，则请与安捷伦科技公司联系。在中国，请拨打800 820 3278。

24、如何避免液相基线飘移？
基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱，净化样品，然后使用新溶剂。 向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。减小室温变化，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是 HPLC 级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。

25、如何排除流动相/流动池中的气泡？
避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。 如果流动池中出现气泡，则先摘下色谱柱，用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。 直到基线上看不到尖峰为止。气泡就应该清除掉了。