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液相色谱仪是属于易学难用的仪器，比较讲究&濒诲辩耻辞;正确使用&谤诲辩耻辞;和经验。液相工作者接触最多的是流动相，流动相是造成液相色谱各种问题的关键源头。液相色谱仪常见的故障一是堵，二是漏。&濒诲辩耻辞;堵&谤诲辩耻辞;的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。

注：流动相以甲醇为例，色谱柱以C18 为例，液相色谱仪引起堵的原因如下：

    &苍产蝉辫;原因一：配制流动相时细菌污染

首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。+鲍&补尘辫;&补尘辫;新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。

推荐两种解决方法：

　　（1） 理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。

　　（2） 成箱购买市售品牌纯净水，如500ml 一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可，也很方便。每次成本2 元左右。细节是：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到后面有一个过滤的步骤。从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。

因为：

（1） 流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。

（2） 流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000 多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。

（3） 流动相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。

（4） 在实际工作未发现流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6 年时间没有做过流动相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下我们的柱寿命是比较长的。

　　原因二：使用流动相时的细菌污染

　　指的是：流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。

举最简单的例子：50％的甲醇水流动相，有两种使用方式。

一种方式是在上机前就配好混合在一起；

另一种方式是在流路A 放纯甲醇，流路B 放纯水。

从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。它有一个致命的缺陷就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌（很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相的一组。从实际实验效果来说，建议用10％的甲醇水代替纯水溶液（不同比例甲醇水的细菌总数实验：在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全杀菌了），这样可以有效排除长细菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。

     原因叁：不适当操作

　　1） 在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。

　　2） 样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成阻塞不畅。

　　3） 在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成了死堵，压力快速升高超过警戒值。

　　4） 在使用金属管路作出废液管时，应当注意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且实验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，的确有发生过。

　　查堵的方法：在发生&濒诲辩耻辞;堵&谤诲辩耻辞;的现象后，就需要找出原因，主要是什么位置发生了&濒诲辩耻辞;堵&谤诲辩耻辞;。注意，绝大多数情况下，整个系统只会有一个地方发生堵塞。查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，如果某一个部件（柱子除外）装上和拆下时的压力差别很大，可发展变化判断。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来判断。