四级杆是很好的质量分析仪器,叁重四极杆质谱作为高端产物,已经大量进入了我国商检、质检和研究单位。毋庸置疑,叁重四极杆是定量的不二之选,在定量方面有绝对优势。
质谱分析具有高灵敏度,样品用量少,高准确度,分析速度快, 分离和鉴定同时进行等优点。常见的质谱离子源E SI、A P C I、M A LD I。 常见质谱分析仪器有四级杆分析器,飞行时间分析器 (TOF ),傅立叶转换一离子回旋加速共振(F T-IC R )。
1、 叁重四级杆也叫做蚕蚕蚕质谱
第一个四级杆根据设定的质合比范围扫描和选择所需的离子;
第二个四级杆,也称碰撞池,用于聚集和传送离子。在选择离子飞行的途中,引入碰撞气体氮气;
第叁个四级杆用于分析在碰撞池中产生的碎片离子。
简单的说:Q1 可以筛选母离子 mz1;Q2 通过碰撞碎裂打碎离子,形成碎片离子峰;Q3 筛选子离子,定量子离子碎片强度 mz2。
实际上,碰撞池采用了六极杆的设计,拥有更好的聚焦及传输功能,四级杆就被淘汰了,但还沿用叁重四级杆的名称。
2、每个四级杆分析器工作方式主要有三种 :
全离子通过 (TTI)、扫描 (SC A N )、选择离子监测(SIM )。
将两个四级杆在空间上串联起来,主要的工作方式有全扫描(Scan),选择离子监测(SIM ),子离子扫 描 (Product Ion Scan), 母离子扫 描 (Precur—sor Ion Scan), 多重反应监测 (M R M )。
3、叁重四极杆工作模式
4、告诉你MRM 假阳性率较低的原因
MRM 假阳性率较低的原因:利用母离子和子离子的共同特征,定量选择性提高。
例如:
– 如果样品 A 母离子 697 和样品 B542 在打碎后都具有子离子 245;
– 如果直接以特征离子 245 定量 A697 ,那么样品 B 就会对样品 A 的定量造成干扰;
– 而利用离子对 697-245 定量, B542 在 A697 通过 Q1 时无法通过 Q1 ,这样就排除了B542 的干扰。
5、选择性离子监测与全扫描对比
在质谱应用领域里,叁重四级杆质谱是最灵敏和定量重现性最好的仪器,
使用三重四级杆质谱仪有以下优势:
(1)样品不需进行衍生化;
(2)在单个分析中实现确认定量;
(3)在复杂很脏的基体中的低检测限,提高实验室效率、产出率;
(4)获得更可靠和可值得信赖的测试结果。
举个例子:叁重四级杆检测叁聚氰胺
在叁聚氰胺的尝颁/惭厂-惭厂检测中,我们可以设定质谱的蚕1过滤出尘/锄127(叁聚氰胺加氢峰,惭+贬+),蚕2碎裂(颁滨顿)后产生的碎片:
三聚氰胺的加氢峰127在Q2中变为110、85、68、60等m/z的碎片,即: 以分子量代表化学反应物和产物:(127)=>(110)+(85)+(68)+(60)
Q2中包含4个反应(Reaction): 1. (127)->(110) ;2. (127)->(85) ; 3. (127)->(68) ; 4. (127)->(60)。
我们可以通过使用Q3检测碎片离子110、85、68或60来反映三聚氰胺的强度。通过偏最小二乘法可以通过多个子离子强度计算母离子强度。实际上在质检部门,实验人员只需要选择85或68这种强度较高的子离子峰来检测,就足以精确的检测奶粉中三聚氰胺的含量,灵敏度可高达50ppb,比GCMS的2ppm高出50倍。
当然在实际使用过程中,往往需要在一份样品中一次性同时检测几十甚至一千种有害物质。这时可以分别对每一个项目选择1~2个离子对,编辑成表让QQQ来循环定量检测,类似于SIM。在美国FDA的实验室中,一台自动进样的叁重四极杆质谱每昼夜可以测量20~100个样品,定量检测数万个项目。
叁重四级杆质谱定量分析
叁重四级杆通过离子打碎获得特异性子离子,子离子在通过蚕3后时在接收器上转化为电信号,反映到分析软件就是离子强度图。在一定线性范围下,分析物浓度越高,打到接收器上的离子就越多,信号越强,这是定量的基础。
此外在定量时可以选择用峰高或峰面积定量,一般选用峰面积定量准确。因为是定量,所以必需标准曲线,原理与高效液相类似。一般多用内标法定量,以排除质谱重现性和样品处理造成的影响。
四极杆对于离子的选择性通过是交替进行的,在所有离子通道之间快速切换。随着设置离子对数量的增加,每个离子所占用的检测时间缩短,这会影响到其检测灵敏度,但是只要实际样品和标准溶液所采用的分析方法一致,定量的准确性理论上是不受影响的。
叁重四级杆环境条件
环境要求实验室温度为 15~27℃ , 温度变化<>℃/ h , 相对湿度< 80="">, 质谱仪在工作时 ,电路板及分子蜗轮泵会产生大量的热量 , 要求室温不大于27℃ 。长期处于高温下运行,会导致电路板损坏及降低泵的使用寿命。仪器需要的气体有 3 处,分别是雾化气 ,干燥气和碰撞气 。安捷伦三重四级杆质谱仪都使用氮气 ,w aters 、岛津质谱仪碰撞气使用氩气,雾化气和干燥器使用氮气。作为雾化气和干燥气的使用的氮气 , 要求纯度大于 95.5 % 。
虽然三重四级杆是定量的不二之选,但相对于飞行时间质谱 ,离子阱质谱 ,磁质谱, 三重四级杆质谱灵敏度不高, 主要还是应用于与液相色谱联用(LC-MS),用作定量分析。将液相色谱高效的在线分离能力与质谱的高选择性 、高灵敏度 的检测能力相结合 ,弥补了传统液相检测器的不足 ,可以同时得到化合物的保留时间、分子量及特征结构碎片等丰富的信息,是组分复杂样品和微量/痕量样品分离分析很有力的研究手段。
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