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怎样选择高效液相色谱柱?

发布时间:2018-09-11       点击次数:9231

现代高效液相色谱中,分离效果好坏的一个重要指标是色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,为选择合适的,这里总结三点色谱填料: 硅胶基质填料、聚合物填料、其他无机填料。

一.硅胶基质填料

1.正相色谱

   正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。

   由于硅胶表面的硅轻基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组份的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

   正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正己烷(Hexane)、氯仿(Choroform)、二氯甲烷 (Methylene Cloride)等。

2.反相色谱

   反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

   反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲掖与甲醇、乙情等的混合物。

   样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。

  常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H,(Phenyl)等。

二.聚合物填料

    聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等,其主要优点是在pH值为1一14均可使用。

    相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。

    现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。

叁.其他无机填料

       其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化.由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的 用途.如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料.这种填料的分离不同与硅胶基质烷基 键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基 键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由 于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用.氧化铝也可用于HPLC, 氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用. 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用, 新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应 用PH范围1~14,温度可达100℃.由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难 度,其重要用途与优势尚在进行中.

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